Kulit buah pamelo (Citrus maxima) mengandung senyawa bioaktif seperti flavonoid dan fenolik yang berpotensi sebagai antibakteri alami terhadap Escherichia coli, di mana efektivitasnya dapat ditingkatkan melalui fermentasi kombucha. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis dan membandingkan aktivitas antibakteri ekstrak etanol 70% dan kombucha kulit pamelo konsentrasi 20%, 40%, dan 60% terhadap Escherichia coli. Ekstraksi dilakukan secara maserasi, sedangkan kombucha difermentasi menggunakan SCOBY selama 7 hari. Pengujian antibakteri menggunakan metode difusi cakram (Kirby-Bauer) pada media MHA. Hasil penelitian menunjukkan bahwa sediaan kombucha memiliki daya hambat yang lebih kuat dibandingkan ekstrak etanol 70%. Diameter zona hambat ekstrak pada konsentrasi 20%, 40%, dan 60% berturut-turut adalah 8,50 mm, 11,20 mm, dan 14,60 mm, sedangkan sediaan kombucha menghasilkan zona hambat sebesar 12,10 mm, 14,20 mm, dan 16,50 mm. Analisis One-Way ANOVA menunjukkan perbedaan signifikan daya hambat antar kelompok perlakuan (p<0,05). Disimpulkan bahwa kombucha kulit buah pamelo memiliki efektivitas antibakteri yang lebih tinggi dibandingkan ekstrak etanol 70% terhadap Escherichia coli, dengan aktivitas optimum pada konsentrasi 60%.