Ketombe merupakan gangguan kulit kepala yang umumnya disebabkan oleh pertumbuhan jamur Malassezia globosa dan Malassezia furfur. Namun penggunaan antijamur sintetis dalam jangka panjang berpotensi menimbulkan efek samping sehingga diperlukan alternatif bahan alami, salah satunya rumput laut merah (Gracilaria verrucosa). Penelitian digunakan untuk mengidentifikasi kandungan metabolit sekunder ekstrak Gracilaria verrucosa serta mengevaluasi aktivitas antijamurnya terhadap Malassezia globosa dan Malassezia furfur secara in vitro. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium menggunakan metode difusi cakram dengan konsentrasi ekstrak 150, 200, 250, dan 300 mg/mL. Hasil skrining fitokimia menunjukkan ekstrak positif mengandung flavonoid, alkaloid, tanin, dan saponin. Standarisasi ekstrak menunjukkan rendemen sebesar 10,22%, kadar air 9,90%, susut pengeringan 10%, kadar abu total 12,3%, serta bebas etanol sehingga memenuhi persyaratan mutu ekstrak. Aktivitas antijamur meningkat seiring peningkatan konsentrasi ekstrak. Diameter zona hambat terbesar diperoleh pada konsentrasi 300 mg/mL, yaitu 11,2 mm terhadap Malassezia globosa dan 16,6 mm terhadap Malassezia furfur. Disimpulkan bahwa ekstrak Gracilaria verrucosa memiliki aktivitas antijamur terhadap Malassezia globosa dan Malassezia furfur, dengan konsentrasi 300 mg/mL sebagai konsentrasi yang paling efektif dalam menghambat pertumbuhan kedua jamur uji